胱抑素CElisa試劑盒測(cè)定的常用模式--固相捕獲法測(cè)IgM抗體
胱抑素CElisa試劑盒在病原體急性感染的診斷中，通常需檢測(cè)IgM抗體，如急性甲型肝炎診斷的血清抗HAVIgM檢測(cè)、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM檢測(cè)和TORCH項(xiàng)目的系列IgM檢測(cè)等。IgM抗體也有使用間接法測(cè)定的，如目前在市場(chǎng)上可見到的有些TORCH系列的IgM檢測(cè)試劑盒。在使用間接法測(cè)IgM抗體時(shí)，由于臨床血清樣本中含有高濃度的IgG抗體，其中部分特異IgG抗體將與IgM抗體競(jìng)爭(zhēng)與固相抗原結(jié)合，從而干擾IgM抗體的檢測(cè)。
因此，在使用間接法測(cè)定IgM抗體時(shí)，通常須將血清樣本用抗人IgG抗體或SPA預(yù)處理，以去除IgG的干擾。這樣不但測(cè)定較為繁瑣，而且影響測(cè)定的特異性和靈敏度。目前，常用的IgM抗體檢測(cè)方法為捕獲法，即以抗人IgM抗體（抗人u鏈）作為固相抗體，當(dāng)加入血清標(biāo)本時(shí)，其中的IgM類抗體（特異的和非特異的）即可被固相抗體捕獲，再加入特異抗原，其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后，加入酶標(biāo)抗特異抗原的抗體，zui后加入底物顯色。具體操作步驟如下：
1．首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗體，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗體后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。
2．加入含待測(cè)IgM抗體的臨床樣本如血清等，溫育一定時(shí)間后洗板；此時(shí)，待測(cè)樣本中的IgM抗體就會(huì)與固相上的抗P鏈抗體反應(yīng)而吸附于固相上。
3．加入特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等，溫育一定時(shí)間后洗板；此時(shí)，特異抗原就會(huì)與固相上的特異IgM抗體發(fā)生反應(yīng)。
4．加入酶標(biāo)記的抗特異抗原的抗體，溫育一定時(shí)間后洗板；此時(shí)，在固相上即形成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物。
5．胱抑素CElisa試劑盒加入酶底物，溫育顯色測(cè)定。
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胱抑素CElisa試劑盒
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